Микросома - Microsome

В клеточная биология, микросомы неоднородны везикулярный артефакты (диаметром ~ 20-200 нм), воссозданные из кусочков эндоплазматический ретикулум (ER) когда эукариотический клетки разбиваются в лаборатории; микросомы отсутствуют в здоровых живых клетках.[1]

Микросомы можно сконцентрировать и отделить от других клеточных остатков с помощью дифференциальное центрифугирование. Неразрушенные клетки, ядра, и митохондрии осадок в 10 000 г, тогда как растворимые ферменты и фрагментированный ЭР, содержащий цитохром P450 (CYP), остаются в растворе (g - ускорение свободного падения Земли). При 100000 g, достигаемой за счет более быстрого вращения центрифуги, ER осаждается из раствора в виде осадка, но растворимые ферменты остаются в супернатант. Таким образом, цитохром P450 в микросомах концентрируется и выделяется. Микросомы имеют красновато-коричневый цвет из-за наличия гем. Из-за необходимости в многочастной белковой системе микросомы необходимы для анализа метаболической активности CYP. Эти CYP очень распространены в печени крыс, мышей и людей, но также присутствуют во всех других органах и организмах.

Чтобы получить микросомы, содержащие определенный CYP, или большое количество активного фермента, микросомы получают из Sf9 клетки насекомых или в дрожжах через гетерологичное выражение. Альтернативно выражение в кишечная палочка целых или усеченных белков.[2][3] Таким образом, микросомы являются ценным инструментом для исследования метаболизма соединений (ингибирование ферментов, клиренс и метаболит идентификации) и для изучения лекарственного взаимодействия с помощью in vitro -исследование. Исследователи часто выбирают партии микросом на основе уровня ферментативной активности конкретных CYP. Некоторые партии доступны для изучения конкретных популяций (например, микросомы легких курильщиков и некурящих) или разделены на классификации для достижения целевых уровней активности CYP для исследований ингибирования и метаболизма.

Исследователи используют микросомы для имитации активности эндоплазматического ретикулума в пробирке и проводят эксперименты, требующие синтеза белка на мембране; они дают ученым возможность выяснить, как белки образуются в ER в клетке, воссоздав этот процесс в пробирке.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Воет Д., Воет Дж. Г. (2004). Биохимия (3-е изд.). Вайли. п.1309. ISBN  0-471-19350-X.
  2. ^ Пан Й., Абд-Рашид Б.А., Исмаил З., Исмаил Р., Мак Дж.В., Онг CE (2011). «Гетерологичная экспрессия человеческих цитохромов P450 2D6 и CYP3A4 в Escherichia coli и их функциональная характеристика». Белковый журнал. 30 (8): 581–91. Дои:10.1007 / s10930-011-9365-6. PMID  22001938.
  3. ^ Schwarz D, Kisselev P, Honeck H, Cascorbi I, Schunck WH, Roots I (2001). «Совместная экспрессия вариантов человеческого цитохрома P4501A1 (CYP1A1) и редуктазы NADPH-цитохром P450 человека в системе бакуловирус / клетки насекомых». Xenobiotica; Судьба чужеродных соединений в биологических системах. 31 (6): 345–56. Дои:10.1080/00498250110055947. PMID  11513247.

внешняя ссылка