Пегилирование - PEGylation

Эта статья о ПЭГилировании в фармацевтическом контексте. Для массового промышленного процесса см. Этоксилирование.

Полиэтиленгликоль

Пегилирование (часто стилизованный пегилирование) представляет собой процесс как ковалентного, так и нековалентного присоединения или амальгамирования полиэтиленгликоль (ПЭГ, в аптеке звонили макрогол ) полимерные цепи к молекулам и макроструктурам, таким как лекарство, терапевтический белок или везикула, которые затем описываются как ПЭГилированный (пегилированный).^[1][2][3] ПЭГилирование обычно достигается путем инкубации реакционноспособного производного ПЭГ с молекулой-мишенью. Ковалентное присоединение ПЭГ к лекарству или терапевтическому белку может «замаскировать» агент от иммунной системы хозяина (уменьшая иммуногенность и антигенность ) и увеличивают его гидродинамический размер (размер в растворе), что продлевает время циркуляции за счет уменьшения почечный оформление. ПЭГилирование также может обеспечить растворимость в воде гидрофобный лекарства и белки. Доказав свою фармакологический Преимущества и приемлемость, технология ПЭГилирования является основой растущей многомиллиардной индустрии.^[4]

Методология

Сравнение уриказа и ПЭГ-уриказа; ПЭГ-уриказа включает 40 полимеров ПЭГ 10 кДа. Пегилирование улучшает его растворимость при физиологическом pH, увеличивает период полужизни в сыворотке и снижает иммуногенность без ущерба для активности. Верхние изображения показывают весь тетрамер, нижние изображения показывают один из лизинов, который является ПЭГилированным. (уриказа из PDB: 1uoxИ ПЭГ-уриказа модель из ссылки;^[5] включено только 36 полимеров ПЭГ)

ПЭГилирование - это процесс присоединения цепей полимерного ПЭГ к молекулам, чаще всего пептиды, белки, и антитело фрагменты, которые могут повысить безопасность и эффективность многих терапия.^[6][7] Он вызывает изменения в физико-химических свойства включая изменения в конформация, электростатический привязка, гидрофобность и т.д. Эти физические и химические изменения увеличивают системное удержание терапевтического агента. Кроме того, он может влиять на аффинность связывания терапевтического компонента с рецепторами клетки и может изменять характер абсорбции и распределения.

ПЭГилирование путем увеличения молекулярной массы молекула, может дать несколько существенных фармакологических преимуществ по сравнению с немодифицированной формой, например, улучшенный препарат, средство, медикамент растворимость, сниженная частота дозирования без снижения эффективности с потенциально сниженным токсичность, увеличенный срок обращения, увеличенный препарат, средство, медикамент стабильность и повышенная защита от протеолитической деградации; привязанные к Интернету формы также могут иметь право на патентную защиту.^[8]

Пегилированные фармацевтические препараты на рынке

Крепление инертного и гидрофильный о полимере впервые сообщили около 1970 года, чтобы продлить жизнь крови и контролировать иммуногенность из белки.^[9] В качестве полимера был выбран полиэтиленгликоль.^[10][11] В 1981 году Дэвис и Абуховски основали Enzon, Inc., которая вывела на рынок три пегилированных препарата. Позже Абуховски основал и является генеральным директором Prolong Pharmaceuticals.^[12]

Клиническая ценность пегилирования в настоящее время хорошо известна. АДАГЕН (пегадемаза крупного рогатого скота), произведенный Enzon Pharmaceuticals, Inc., США, был первым пегилированным белком, одобренным Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) в марте 1990 года, чтобы выйти на рынок. Он используется для лечения тяжелой формы синдрома комбинированной иммуногенности (ADA-SCID) в качестве альтернативы трансплантация костного мозга и замена ферментов на генная терапия. С момента введения АДАГЕНА большое количество пегилированных белков и пептидов фармацевтические препараты последовали, и многие другие находятся в стадии клинических испытаний или в стадии разработки. Продажи двух самых успешных продуктов, Pegasys и Neulasta, в 2011 году превысили 5 миллиардов долларов.^[13][14] Все коммерчески доступные ПЭГилированные фармацевтические препараты содержат метоксиполи (этиленгликоль) или мПЭГ. Пегилированные фармацевтические препараты на рынке (в обратной хронологии по годам утверждения FDA) включают:

• Пегвалиасе (Биомарин) - ПЭГилированный рекомбинантный фенилаланин аммиак-лиаза для лечения Фенилкетонурия, утвержденный FDA для США в мае 2018 г.^[15][16]
• Adynovate - ПЭГилированный антигемофильный фактор VIII для лечения пациентов с гемофилией А. (Baxalta, 2015)^[17]
• Липосома иринотекана (Onivyde) - ПЭГилированный липосомальный тригидрат гидрохлорида иринотекана для лечения метастатического рака поджелудочной железы у взрослых, проходящих лечение гемцитабин -основная терапия. (Ипсен, 2015)
• Plegridy - ПЭГилированный интерферон бета-1а для лечения пациентов с рецидивирующими формами рассеянного склероза. (Биоген, 2014)
• Налоксегол (Мовантик) - ПЭГилированный налоксол для лечения запора, вызванного опиоидами, у взрослых пациентов с хронической нераковой болью (непегилированный метадон может вызвать нежелательные желудочно-кишечные реакции). (АстраЗенека, 2014)
• Пегинезатид (Omontys) - препарат для лечения анемии, связанной с хроническим заболеванием почек, у взрослых пациентов, находящихся на диализе (Affymax /Takeda Pharmaceuticals, 2012)
• Пеглотиказа (Krystexxa) - ПЭГилированная уриказа для лечения подагры (Спаситель, 2010)
• Цертолизумаб пегол (Cimzia) - моноклональные антитела для лечения ревматоидного артрита от умеренной до тяжелой степени и болезни Крона, воспалительного желудочно-кишечного расстройства (Нектар /UCB Pharma, 2008)
• Метокси полиэтиленгликоль-эпоэтин бета (Mircera) - ПЭГилированная форма эритропоэтина для борьбы с анемией, связанной с хроническим заболеванием почек (Рош, 2007)
• Пегаптаниб (Macugen) - используется для лечения неоваскулярной возрастной дегенерации желтого пятна (Pfizer, 2004)
• Пегфилграстим (Neulasta) - ПЭГилированный рекомбинантный метионил человека колониестимулирующий фактор гранулоцитов для тяжелых рак химиотерапия -индуцированный нейтропения (Amgen, 2002)
• Пегвисомант (Сомаверт) - антагонист мутеина гормона роста человека ПЭГ для лечения акромегалии (Pfizer, 2002)
• Пегинтерферон альфа-2а (Pegasys) - ПЭГилированный интерферон альфа для лечения хронических гепатит С и гепатит Б (Hoffmann-La Roche, 2002)
• Пегинтерферон альфа-2б (ПегИнтрон) - ПЭГилированный интерферон альфа для лечения хронических гепатит С и гепатит Б (Schering-Plough /Энзон, 2000)
• Липосома доксорубицина HCl (Doxil / Caelyx) - ПЭГилированный липосома содержащий доксорубицин для лечения рак (Альза, 1995)
• Пегаспаргаз (Онкаспар) - ПЭГилированный L-аспарагиназа для лечения острый лимфобластный лейкоз у пациентов с гиперчувствительностью к нативной немодифицированной форме L-аспарагиназа (Энзон, 1994). Этот препарат недавно был одобрен для использования на переднем крае.
• Pegademase бычий (Адаген) - ПЭГ-аденозиндезаминаза для лечения тяжелого комбинированного иммунодефицита (ТКИД) (Энзон, 1990)

Использование в исследованиях

Пегилирование имеет практическое применение в биотехнологии для доставки белка, клеточного трансфекция, и редактирование генов в нечеловеческих клетках.^[18]

Обработать

Первой стадией ПЭГилирования является подходящая функционализация полимера ПЭГ на одном или обоих концах. ПЭГ, которые активируются на каждом конце одним и тем же реактивным фрагментом, известны как «гомобифункциональные», тогда как, если присутствующие функциональные группы различны, то производное ПЭГ называют «гетеробифункциональным» или «гетерофункциональным». Химически активные или активированные производные полимера PEG получают для присоединения PEG к желаемой молекуле.^[19]

Общие процессы ПЭГилирования, используемые до настоящего времени для конъюгации белков, можно в общих чертах разделить на два типа, а именно периодический процесс в фазе раствора и периодический процесс с подпиткой на колонке.^[20] Простой и обычно принятый периодический процесс включает смешивание реагентов вместе в подходящем буферном растворе, предпочтительно при температуре от 4 до 6 ° C, с последующим разделением и очисткой желаемого продукта с использованием подходящей методики, основанной на его физико-химических свойствах. в том числе эксклюзионная хроматография (SEC), ионообменная хроматография (IEX), хроматография гидрофобного взаимодействия (HIC) и мембраны или водные двухфазные системы.^[21][22]

Выбор подходящей функциональной группы для производного PEG основан на типе доступной реактивной группы в молекуле, которая будет связана с PEG. Для белков типичные реактивные аминокислоты включают: лизин, цистеин, гистидин, аргинин, аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота, серин, треонин и тирозин. N-концевая аминогруппа и C-концевая карбоновая кислота также могут быть использованы в качестве сайт-специфичного сайта путем конъюгации с полимерами с альдегидными функциональными группами.^[23]

Методы, используемые для образования производных PEG первого поколения, обычно включают реакцию полимера PEG с группой, которая реагирует с гидроксильными группами, обычно ангидриды, хлорангидриды, хлорформиаты и карбонаты. В химии ПЭГилирования второго поколения для конъюгации доступны более эффективные функциональные группы, такие как альдегид, сложные эфиры, амиды и т.д.

Поскольку приложения ПЭГилирования становятся все более и более продвинутыми и изощренными, возрастает потребность в гетеробифункциональных ПЭГ для конъюгации. Эти гетеробифункциональные ПЭГ очень полезны для связывания двух объектов, где необходим гидрофильный, гибкий и биосовместимый спейсер. Предпочтительными концевыми группами для гетеробифункциональных ПЭГ являются малеимид, винилсульфоны, пиридил дисульфид, амин, карбоновые кислоты и NHS сложные эфиры.

Пегилированные агенты третьего поколения, в которых полимер имеет разветвленную, Y-образную или гребенчатую форму, обладают пониженной вязкостью и отсутствием скопления органов.^[24]

Ограничения

Непредсказуемость времени клиренса для ПЭГилированных соединений может привести к накоплению соединений с большим молекулярным весом в печени, что приведет к образованию телец включения без известных токсикологических последствий.^[25] Кроме того, изменение длины цепи может привести к неожиданному времени зазора. in vivo.^[26]Более того, экспериментальные условия реакции ПЭГилирования (т.е. pH, температура, время реакции, общая стоимость процесса и молярное соотношение между производным ПЭГ и пептидом) также влияют на стабильность конечных продуктов ПЭГилирования.^[27]. Чтобы преодолеть вышеупомянутые ограничения, несколько исследователей предложили различные стратегии, такие как изменение размера (Mw), количества, расположения и типа связывания молекулы PEG.^[28]

Смотрите также

• Цитохром с
• Интерферон
• Матричная лазерная десорбция / ионизация
• Протеомика

использованная литература

1. Jokerst, J. V .; Лобовкина, Т .; Zare, R. N .; Гамбхир, С. С. (2011). «ПЭГилирование наночастиц для визуализации и терапии». Наномедицина. 6 (4): 715–728. Дои:10.2217 / нм.11.19. ЧВК  3217316. PMID  21718180.
2. Кноп, К .; Hoogenboom, R .; Fischer, D .; Шуберт, США (2010). «Поли (этиленгликоль) в доставке лекарств: плюсы и минусы, а также возможные альтернативы». Энгью. Chem. Int. Эд. 49 (36): 6288–6308. Дои:10.1002 / anie.200902672. PMID  20648499.
3. Veronese, F.M .; Меро, А. (2008). «Влияние ПЭГилирования на биологические методы лечения». BioDrugs. 22 (5): 315–329. Дои:10.2165/00063030-200822050-00004. PMID  18778113. S2CID  23901382.
4. Дамодаран В. Б.; Плата К. Дж. (2010). «Пегилирование белков: обзор химии и технологических аспектов». Европейский фармацевтический обзор. 15 (1): 18–26.
5. Шерман, MR; Сайфер, MG; Перес-Руис, Ф (3 января 2008 г.). «ПЭГ-уриказа в лечении резистентной к лечению подагры и гиперурикемии». Расширенные обзоры доставки лекарств. 60 (1): 59–68. Дои:10.1016 / j.addr.2007.06.011. PMID  17826865.
6. Veronese, F.M .; Харрис, Дж. М. (2002). «Введение и обзор пегилирования пептидов и белков». Расширенные обзоры доставки лекарств. 54 (4): 453–456. Дои:10.1016 / S0169-409X (02) 00020-0. PMID  12052707.
7. Порфирьева, Н. Н .; Moustafine, R.I .; Хуторянский, В. В. (01.01.2020). «ПЭГилированные системы в фармацевтике» (PDF). Наука о полимерах, серия C. 62 (1): 62–74. Дои:10.1134 / S181123822001004X. ISSN  1555-614X.
8. Milla, P; Досио, Ф (13 января 2012 г.). «ПЭГилирование белков и липосом: мощная и гибкая стратегия улучшения доставки лекарств». Текущий метаболизм лекарств. 13 (1): 105–119. Дои:10.2174/138920012798356934. HDL:2318/86788. PMID  21892917.
9. Дэвис, Фрэнк Ф. (2002). «Происхождение пегнологии». Расширенные обзоры доставки лекарств. 54 (4): 457–8. Дои:10.1016 / S0169-409X (02) 00021-2. PMID  12052708.
10. Абуховски, А; Ван Эс, Т; Palczuk, N.C .; Дэвис, Ф. Ф. (1977). «Изменение иммунологических свойств бычьего сывороточного альбумина путем ковалентного присоединения полиэтиленгликоля». Журнал биологической химии. 252 (11): 3578–81. PMID  405385.
11. Абуховски, А; McCoy, J. R .; Palczuk, N.C .; Ван Эс, Т; Дэвис, Ф. Ф. (1977). «Влияние ковалентного присоединения полиэтиленгликоля на иммуногенность и циркулирующую жизнь каталазы бычьей печени». Журнал биологической химии. 252 (11): 3582–6. PMID  16907.
12. "Доктор Авраам Абуховски, доктор философии - главная". extendpharma.com. Получено 2020-01-15.
13. Клаузер, Александр (руководитель), Roche Group по связям со СМИ, «Рош в 2011 году: сильные результаты и позитивные перспективы», www.roche.com/med-cor-2012-02-01-e.pdf, 1 февраля 2012 г., стр. .7
14. «Годовой отчет и финансовое резюме Amgen за 2011 год», [1] Годовой отчет за 2011 г., pdf, 23 февраля 2012 г., стр. 71
15. Пауэрс, Мари (29 мая 2018 г.). «Заключительный экзамен по биомарину: Palynziq получил одобрение FDA для лечения фенилкетонурии у взрослых». BioWorld.
16. Леви, Харви Л .; Саркисян, Кристина Н .; Стивенс, Раймонд С.; Скрайвер, Чарльз Р. (июнь 2018 г.). «Фенилаланин-аммиаклиаза (PAL): от открытия до ферментативной заместительной терапии фенилкетонурии». Молекулярная генетика и метаболизм. 124 (4): 223–229. Дои:10.1016 / j.ymgme.2018.06.002. PMID  29941359.
17. https://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm472643.htm
18. Балаш, Даниил; Годби, WT (29 октября 2010 г.). «Липосомы для использования в доставке генов». Журнал доставки лекарств. 2011: 326497. Дои:10.1155/2011/326497. ЧВК  3066571. PMID  21490748.
19. Pasut, G .; Веронезе, Ф. М. (2012). «Современное состояние пегилирования: большая универсальность, достигнутая после сорока лет исследований». Журнал контролируемого выпуска. 161 (2): 461–472. Дои:10.1016 / j.jconrel.2011.10.037. PMID  22094104.
20. Плата, Конан Дж .; Ван Альстайн, Джеймс М. (2006). «PEG-белки: инженерия реакций и вопросы разделения». Химическая инженерия. 61 (3): 924. CiteSeerX  10.1.1.509.2865. Дои:10.1016 / j.ces.2005.04.040.
21. Веронезе, отредактированный Франческо М. (2009). «Очистка и характеристика белковых конъюгатов». Пегилированные белковые препараты фундаментальная наука и клиническое применение (Online-Ausg. Ed.). Базель: Биркхойзер. С. 113–125. ISBN  978-3-7643-8679-5.
22. Плата, Конан Дж. (2003). «Эксклюзивная реакционная хроматография (SERC): новый метод пегилирования белков». Биотехнологии и биоинженерия. 82 (2): 200–6. Дои:10.1002 / бит. 10561. HDL:10092/351. PMID  12584761.
23. Плата, Конан Дж .; Дамодаран, Винод Б. (2012). «Производство ПЭГилированных белков». Технология производства биофармацевтических препаратов. п. 199. Дои:10.1002 / 9783527653096.ch7. ISBN  9783527653096.
24. Райан, Шинеад М; Мантовани, Джузеппе; Ван, Сюэсюань; Хэддлтон, Дэвид М; Брайден, Дэвид Дж (2008). «Достижения в области ПЭГилирования важных биотехнологических молекул: аспекты доставки». Мнение эксперта по доставке лекарств. 5 (4): 371–83. Дои:10.1517/17425247.5.4.371. PMID  18426380. S2CID  97373496.
25. Каваи, Ф (2002). «Микробная деградация простых полиэфиров». Прикладная микробиология и биотехнология. 58 (1): 30–8. Дои:10.1007 / s00253-001-0850-2. PMID  11831473. S2CID  7600787.
26. Веронезе, Ф. М. (2001). «Пегилирование пептидов и белков: обзор проблем и решений». Биоматериалы. 22 (5): 405–17. Дои:10.1016 / s0142-9612 (00) 00193-9. PMID  11214751.
27. Дж. Гонсалес-Вальдес, М. Рито-Паломарес, Дж. Бенавидес, Достижения и тенденции в разработке, анализе и характеристике конъюгатов полимер-белок для биопроцессов с «ПЭГ-покрытием», Anal. Биоанал. Chem. 403 (2012) 2225–2235. DOI: 10.1007 / s00216-012-5845-6.
28. Дж. Чжан, Б. Хань, Х. Лин, Х. Ву, Х. Ян, Модификация антимикробного пептида полиэтиленгликолем с низкой молярной массой, J. Biochem. (Токио). 144 (2008) 781–788. DOI: 10.1093 / jb / mvn134. [19] S. Obuobi, Y. Wang, J.S. Khara, A. Riegger, S.L. Куан, P.L.R. Ee, Антимикробная и антибиотическая активность поверхностно-модифицированных поликатионных наночастиц альбумина со сниженной гемолитической активностью, Macromol. Biosci. 18 (2018) 1800196. DOI: 10.1002 / mabi.201800196.