Тест Клейхауэра – Бетке - Kleihauer–Betke test

Не путать с Тест Кирби – Бауэра, который также часто называют «тестом КБ».

Тест Клейхауэра – Бетке
Тест Клейхауэра, показывающий эритроциты плода розово-розового цвета, в то время как эритроциты взрослого человека воспринимаются только как «призраки».
Цель	измеряет передачу гемоглобина плода

В Тест Клейхауэра – Бетке («KB»), Пятно Клейхауэра – Бетке («KB»), Тест Клейхауэра или кислотное элюирование, это анализ крови используется для измерения количества гемоглобин плода переведен из плод к матери кровоток.^[1] Обычно это выполняется на Резус-отрицательный матери для определения необходимой дозы Rho (D) иммунный глобулин (RhIg) для подавления образования Rh антитела в матери и предотвратить Резус-болезнь у будущих резус-положительных детей.^[2] Он назван в честь Энно Клейхауэра и Клауса Бетке, которые описали его в 1957 году.

Детали теста

KB-тест - это стандартный метод количественной оценки кровоизлияние у плода и матери (FMH). Он использует преимущества дифференциальной устойчивости гемоглобина плода к кислоте. Стандарт мазок крови готовится из материнского кровь и подвергался воздействию кислотной ванны. Это удаляет взрослого гемоглобин, но не гемоглобин плода, из красных кровяных телец. Последующее окрашивание по методу Шепарда,^[3] заставляет клетки плода (содержащие гемоглобин плода) иметь розово-розовый цвет, в то время как эритроциты взрослого человека воспринимаются только как «призраки». Под микроскопом подсчитывают 2000 клеток и рассчитывают процентное соотношение фетальных и материнских клеток.^{[нужна цитата ]}

У пациентов с положительными тестами последующее тестирование в послеродовой необходимо провести проверку, чтобы исключить возможность ложно положительный. Это может быть вызвано процессом у матери, который вызывает стойкое повышение гемоглобина плода, например серповидноклеточная черта.^{[нужна цитата ]}

Сравнение с другими более дорогими или технологически продвинутыми методами, такими как проточной цитометрии показал, что окраска KB, как и более продвинутые методы, чувствительна к обнаружению FMH.^[1] Ошибки подсчета фона могут привести к оценке плода объемом до 5 мл. потеря крови когда такой кровопотери на самом деле нет, но стандартные методы, доступные в большинстве лабораторий, допускают чрезвычайно низкую вероятность возврата ложноположительного результата при более тяжелом FMH.

Оригинальная техника

Метод

Тонкие мазки готовят из капиллярной или венозной крови, собранной в антикоагулянты, такие как гепарин, оксалат, цитрат или ЭДТА. Мазки сушат на воздухе в течение 10–60 минут, фиксируют в 80 об.% Этаноле в течение 5 минут при 20–22 ° C, промывают водопроводной водой и сушат на воздухе. Затем пленки погружают в цитрат-фосфатный буфер на 5 минут при 37 ° C и осторожно перемешивают в течение примерно 3 минут. Слайды ополаскивают водопроводной водой, сушат и окрашивают гематоксилином Эрлиха в течение 3 минут, затем промывают водой и снова сушат. Их контрастируют эритрозином в течение 3 мин. После окончательной промывки пленки сушат и исследуют под световым микроскопом.^[4]

Результаты оригинального метода

Клетки гемоглобина F густо окрашиваются эритрозином, клетки гемоглобина A выглядят как клетки-призраки, а промежуточные клетки окрашиваются более или менее в розовый цвет. Ретикулоциты, содержащие гемоглобин А, могут появляться как промежуточные клетки и / или могут показывать внутриклеточную грануляцию. Тельца включения (тельца Хайнца, осажденные α-цепи или β-цепи) видны в элюированных клетках как компактные включения разного размера. Гемоглобин А элюируется независимо от того, является ли он оксигемоглобином, метгемоглобином, цианметгемоглобином, восстановленным гемоглобином или карбоксигемоглобином.

Количественное определение F-клеток гемоглобина

Методы, разработанные Шнайдером и Людвигом^[5] и Bartsch 'рекомендуются. Для определения внутриклеточного распределения гемоглобина F можно использовать полуколичественный метод Shepard, Weatherall и Conley ».

Нормальные значения

Нормальные значения гемоглобина F-клеток у взрослых, первоначально опубликованные Клейхауэром, были ниже 0,01%; у доношенных новорожденных они превышают 90%.

Использует

Оценка тяжести кровоизлияния плода и матери

Чтобы определить, указывает ли положительный тест на FMH на вероятную причину гибели плода, следует рассчитать процент общего потерянного объема крови плода, сделав соответствующие корректировки на основе следующих известных соотношений:

• • размер эритроцита плода в 1,22 раза больше, чем у взрослого эритроцита;
  • известно, что пятно KB имеет иметь в виду 92% успеха в обнаружении эритроцитов плода;
  • у женщины на сроке беременности или в ближайшем будущем средний объем материнских эритроцитов составляет примерно 1800 мл;
  • средний плод гематокрит составляет 50%; и
  • в мертворождение, средний объем крови плода составляет ${\displaystyle 150{\frac {ml}{kg}}}$

Эти ограничения затем можно применить для получения формулы

${\displaystyle PFB={\frac {(3200)(FC)}{(FW)(MC)}}}$

куда

• • ${\displaystyle PFB}$ процент потери крови плода;
  • ${\displaystyle FC}$ наблюдаемое количество эритроцитов плода;
  • ${\displaystyle MC}$ это наблюдаемое количество материнских красных кровяных телец (примечание: у нас есть ${\displaystyle MC=TC-FC}$, куда ${\displaystyle TC}$ общее наблюдаемое количество эритроцитов матери и плода);
  • ${\displaystyle FW}$ - вес мертворожденного плода в килограммах.

Количество ампул RhD

Для оценки необходимого количества флаконов с иммуноглобулином Rho (D) можно принять следующие уравнения:^[6]

• Объем (мл) фетальной крови =% фетальных клеток x 50
• Необходимое количество ампул с 300 мкг RhIG = объем фетальной крови / 30 мл

Объединение этих двух уравнений приводит к:^[6]

• Количество флаконов =% клеток плода x 50/30

Это примерно равно:

• Количество флаконов =% плодных клеток x 1,7

На практике, если число справа от десятичной точки ≥5, оно округляется в большую сторону, чтобы добавить один пузырек.^[6]

Разрешение мертворождения

Предположим, что окрашивание KB выполнено и ${\displaystyle TC=5000}$ наблюдаются общие эритроциты, ${\displaystyle FC=200}$ из которых обнаружены эритроциты плода. Предположим далее, что масса мертворожденного рассматриваемого плода равна ${\displaystyle FW=2.0kg}$. Тогда можно сделать вывод, что общий процент потери крови плода составляет приблизительно

${\displaystyle PFB={\frac {(3200)(FC)}{(FW)(MC)}}={\frac {(3200)(200)}{(2.0)(4800)}}={\frac {200}{3}}=66.667}$

до пяти значащие цифры. Следовательно, мы могли бы сделать вывод, что рассматриваемый плод потерял 66,667% (две трети) своей крови из-за FMH. Как правило, мертворождение весьма вероятно при любом значении ${\displaystyle PFB\geq 20}$особенно если плод резко теряет такое количество крови; в этом примере мы, следовательно, могли бы заподозрить FMH как причину мертворождения. Однако важно отметить, что такой диагноз все еще не совсем убедительный; плоды, теряющие большое количество крови в течение длительных периодов времени, способны компенсировать эту более медленную кровопотерю; поскольку окраска KB ничего не говорит нам об уровне остроты зрения FMH. Это означает, что невозможно полностью соотнести положительную окраску КБ и высокую ${\displaystyle PFB}$ с мертворождением, хотя во многих случаях, учитывая другую информацию, такую ​​как известные наследственные осложнения беременности, чрезвычайно высокий положительный коэффициенты корреляции ${\displaystyle r\approx +1.000}$ между FMH и мертворождением.^{[нужна цитата ]}

Проблемы обнаружения эритроцитов плода

С плода и матери клетки крови имеют одинаковую продолжительность жизни в материнском кровотоке, можно получить информативные результаты окрашивания KB в течение значительного периода времени после мертворождения. Однако, если мать и плод ABO несовместимы, более важно быстро выполнить окрашивание KB после мертворождения, поскольку эритроциты плода будут быстро удалены из кровотока матери, в результате чего окрашивание KB занижает степень FMH, если таковая имеется. в литературе относительно ложных срабатываний при отборе проб после родов. В общем, это не проблема. Роды действительно приводят к более высокой частоте обнаружения микрокровоизлияний, но это не должно мешать интерпретации FMH как возможной причины мертворождения. Нет необходимости брать образец до индукции, начала родов, родов, плацентарных родов и т. Д., Несмотря на то, что утверждается в некоторых опубликованных источниках. Однако, если будет использовано кесарево сечение, отказ от отбора пробы до этого приведет к 2% ложноположительным результатам.^{[нужна цитата ]}

Наконец, все, что вызывает сохранение гемоглобина плода в клетках материнской крови, значительно усложнит интерпретацию. Определенный гемоглобинопатии, наиболее распространенным из которых является серповидно-клеточная анемия, сделайте это. В целом, примерно в 1–3% случаев это может привести к неверной интерпретации.

Все случаи материнской травмы

В статье, опубликованной в 2004 году, сделан вывод о том, что тест Клейхауэра-Бетке (KB) необходим во всех случаях материнской травмы, поскольку клиническая оценка недостаточно чувствительна для определения риска преждевременных родов. Он точно предсказывает риск преждевременных родов после травмы матери, тогда как в статье сделан вывод, что клиническая оценка - нет. При отрицательном результате теста KB продолжительность электронного мониторинга плода после травмы может быть ограничена. При положительном тесте KB значительный риск преждевременных родов требует тщательного наблюдения. KB тестирование имеет важные преимущества для всех жертв материнской травмы, независимо от статуса резус-фактора.^[7]

Смотрите также

• Удачный тест

Рекомендации

1. Катияр Р., Криплани А., Агарвал Н., Бхатла Н., Кабра М. (2007). «Обнаружение материнского кровоизлияния плода после взятия пробы ворсинок хориона с помощью теста Клейхауэра-Бетке и повышения уровня альфа-фето-белка в сыворотке крови матери». Пренат. Диаг. 27 (2): 139–42. Дои:10.1002 / pd.1632. PMID  17191260.
2. Ким Я.А., Макар Р.С. (апрель 2012 г.). «Обнаружение кровоизлияния в мать». Американский журнал гематологии. 87 (4): 417–23. Дои:10.1002 / ajh.22255. PMID  22231030.
3. Алкогольный гематоксилин, подкисленный хлорид железа, контрастное краситель Шепарда. Фиксатор / Разбавитель Шепарда
4. Клейхауэр, Э (февраль 1974 г.). «Определение гемоглобина плода: метод элюции». CRC Critical Reviews в клинических лабораторных науках (Февраль 1974 г.): 50–52. Дои:10.3109/10408367409107625.
5. Шнайдер, J (1963). Клин. Wochenschr. 41. Отсутствует или пусто | название = (Помогите)
6. Дайан М. Кривко; Сара М. Шунквайлер. «Тест Клейхауэра Бетке». StatPearls, Национальный центр биотехнологической информации. Последнее обновление: Последнее обновление: 20 января 2020 г.
7. Мюнх, Майкл В. «Тестирование Клейхауэра-Бетке важно во всех случаях материнской травмы». Журнал травматологической и неотложной хирургии. Дои:10.1097 / 01.TA.0000096654.37009.B7.

внешняя ссылка

• [1] Тест Клейхауэра