Сферопласт - Spheroplast

Грамотрицательные бактерии, пытающиеся расти и делиться в присутствии антибиотиков, ингибирующих синтез пептидогликана (например, пенициллина), не могут этого сделать, и вместо этого в конечном итоге образуют сферопласты.[1][2]

А сферопласт (или сферопласт в британском языке) - это микробная клетка, из которой клеточная стенка был почти полностью удален, так как под действием пенициллин или лизоцим. Согласно некоторым определениям, термин используется для описания Грамотрицательные бактерии.[3][4] Согласно другим определениям, термин также включает дрожжи.[5][6] Название сферопласт связано с тем, что после переваривания клеточной стенки микроба напряжение мембраны заставляет клетку приобретать характерную сферическую форму.[4] Сферопласты осмотически хрупкие и будут лизировать если передан гипотонический решение.[5]

При использовании для описания грамотрицательных бактерий термин сферопласт относится к клеткам, из которых пептидогликан компонент, но не внешняя мембрана компонент клеточной стенки был удален.[2][5]

Формирование сферопластов

Сферопласты, индуцированные антибиотиками

Разные антибиотики превращают грамотрицательные бактерии в сферопласты. К ним относятся пептидогликан ингибиторы синтеза, такие как фосфомицин, ванкомицин, моеномицин, лактивицин и β-лактамные антибиотики.[1][2] Антибиотики, подавляющие биохимические пути непосредственно перед синтезом пептидогликана также индуцируют сферопласты (например, фосмидомицин, фосфоенолпируват ).[1][2]

Помимо вышеперечисленных антибиотиков, ингибиторы синтеза белка (напр. хлорамфеникол, окситетрациклин, несколько аминогликозиды ) и ингибиторы синтеза фолиевой кислоты (например. триметоприм, сульфаметоксазол ) также вызывают образование сферопластов грамотрицательными бактериями.[2]

Ферментно-индуцированные сферопласты

Фермент лизоцим заставляет грамотрицательные бактерии образовывать сферопласты, но только если мембранный пермеабилизатор, такой как лактоферрин или же этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) используется для облегчения прохождения фермента через внешняя мембрана.[2][7] EDTA действует как стабилизатор проницаемости, связываясь с двухвалентными ионами, такими как Ca2+ и снятие их с внешней мембраны.[8]

Дрожжи грибковые микроорганизмы албиканс можно превратить в сферопласты с помощью ферментов литиказа, хитиназа и β-глюкуронидаза.[9]

Использование и приложения

Открытие антибиотиков

С 1960-х по 1990-е гг. Мерк и Ко. использовали экран из сферопластов в качестве основного метода для открытие антибиотиков, подавляющих биосинтез клеточной стенки. На этом экране, разработанном Юджином Дулани, растущие бактерии подвергались воздействию тестируемых веществ в гипертонических условиях. Ингибиторы синтеза клеточной стенки заставляли растущие бактерии формировать сферопласты. Этот экран позволил открыть фосфомицин, цефамицин C, тиенамицин и несколько карбапенемы.[1]

Зажим патча

An Кишечная палочка сферопласт латали стеклянной пипеткой.

Специально подготовленные гигантские сферопласты Грамотрицательный бактерии может использоваться для изучения функции бактериального ионные каналы с помощью техники, называемой патч зажим, который изначально был разработан для характеристики поведения нейроны и другие возбудимые клетки. Чтобы приготовить гигантские сферопласты, бактерии обрабатывают перегородка ингибитор (например, цефалексин ). Это заставляет бактерии образовывать нити, удлиненные клетки без внутренних поперечных стенок.[10] Через некоторое время клеточные стенки волокон перевариваются, и бактерии распадаются на очень большие сферы, окруженные только их цитоплазматический и внешний мембраны. Затем мембраны можно анализировать на патч зажим аппарат для определения фенотип встроенных в него ионных каналов. Также часто бывает сверхэкспрессировать определенный канал, чтобы усилить его эффект и облегчить определение характеристик.

Техника зажима заплатки гиганта Кишечная палочка сферопласты были использованы для изучения местных механочувствительные каналы (MscL, MscS и MscM) из Кишечная палочка.[11][12] Он был расширен для изучения других гетерологично выраженный ионных каналов, и было показано, что гигантский Кишечная палочка сферопласт можно использовать как систему экспрессии ионных каналов, сравнимую с Xenopus ооцит.[13][14][15][16]

Лизис клеток

Дрожжи клетки обычно защищены толстым клеточная стенка что затрудняет извлечение клеточных белков.[нужна цитата ] Ферментативное переваривание клеточной стенки зимолиазой с образованием сферопластов делает клетки уязвимыми для легкого лизис моющими средствами или быстрыми изменениями осмолярного давления.[9]

Трансфекция

Бактериальные сферопласты с подходящими рекомбинантная ДНК вставлены в них, могут использоваться для трансфицировать клетки животных. Сферопласты с рекомбинантной ДНК вводятся в среду, содержащую клетки животных, и сливаются посредством полиэтиленгликоль (ПЭГ). С помощью этого метода почти 100% клеток животных могут поглощать чужеродную ДНК.[17] При проведении экспериментов по модифицированной Ханахан протокол с использованием хлорида кальция в Кишечная палочка, было определено, что сферопласты могут трансформироваться при 4,9 × 10−4.[18]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б c d Сильвер, L.L (2011). «Глава 2, Рациональные подходы к открытию антибиотиков: пре-геномный направленный и фенотипический скрининг». В Догерти, Т .; Пуччи, М.Дж. (ред.). Открытие и разработка антибиотиков. Соединенные Штаты Америки: Спрингер. С. 33–75. Дои:10.1007/978-1-4614-1400-1_2. ISBN  978-1-4614-1400-1.
  2. ^ а б c d е ж Cushnie, T.P .; O’Driscoll, N.H .; Лэмб, А.Дж. (2016). «Морфологические и ультраструктурные изменения бактериальных клеток как индикатор антибактериального механизма действия». Клеточные и молекулярные науки о жизни. 73 (23): 4471–4492. Дои:10.1007 / s00018-016-2302-2. HDL:10059/2129. PMID  27392605.
  3. ^ «Сферопласт». www.dictionary.com. Dictionary.com. 2019 г.. Получено 21 июля, 2019.
  4. ^ а б «Сферопласт». ahdictionary.com. Словарь английского языка американского наследия. 2019 г.. Получено 21 июля, 2019.
  5. ^ а б c «Протопласты и сферопласты». www.encyclopedia.com. Encyclopedia.com. 2016 г.. Получено 21 июля, 2019.
  6. ^ «Определение сферопласта». www.merriam-webster.com. Мерриам-Вебстер. 2019 г.. Получено 21 июля, 2019.
  7. ^ Tortora, G .; Funke, B .; Кейс, С. (2016). «Глава 4, Функциональная анатомия прокариотических и эукариотических клеток». Микробиология: введение (12-е изд.). Соединенные Штаты Америки: Пирсон. п. 84. ISBN  978-0-321-92915-0.
  8. ^ Ninfa, A.J .; Ballou, D.P .; Бенор, М. (2009). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Соединенные Штаты Америки: John Wiley & Sons, Inc., стр. 234. ISBN  978-0-470-08766-4.
  9. ^ а б Calvert, C.M .; Сандерс, Д. (1995). «Инозитолтрисфосфат-зависимый и -независимый Ca2+ пути мобилизации на вакуолярной мембране грибковые микроорганизмы албиканс". Журнал биологической химии. 270 (13): 7272–80. Дои:10.1074 / jbc.270.13.7272. PMID  7706267.
  10. ^ Kikuchi, K .; Sugiura, M .; Nishizawa-Harada, C .; Кимура, Т. (2015). "Применение кишечная палочка гигантский сферопласт для скрининга лекарств с автоматизированной системой планарного зажима ". Отчеты по биотехнологии. 7: 17–23. Дои:10.1016 / j.btre.2015.04.007. ЧВК  5466043. PMID  28626710.
  11. ^ Martinac, B .; Бюхнер, М .; Delcour, A.H .; Adler, J .; Кунг, К. (1987). "Чувствительный к давлению ионный канал в кишечная палочка". Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 84 (8): 2297–2301. Bibcode:1987ПНАС ... 84.2297М. Дои:10.1073 / pnas.84.8.2297. ЧВК  304637. PMID  2436228.
  12. ^ Blount, P .; Сухарев, С.И .; Moe, P.C .; Кунг, К. (1999). «Механочувствительные каналы бактерий». Методы в энзимологии. 294: 458–482. Дои:10.1016 / с0076-6879 (99) 94027-2. PMID  9916243.
  13. ^ Santos, J.S .; Lundby, A .; Zazueta, C .; Монталь М. (2006). «Молекулярный шаблон для датчика напряжения в романе К.+ канал. I. Идентификация и функциональные характеристики KvLm, напряжение-стробируемого K+ канал от Listeria monocytogenes". Журнал общей физиологии. 128 (3): 283–292. Дои:10.1085 / jgp.200609572. ЧВК  2151562. PMID  16908725.
  14. ^ Nakayama, Y .; Fujiu, K .; Sokabe, M .; Йошимура, К. (2007). «Молекулярная и электрофизиологическая характеристика механочувствительного канала, экспрессируемого в хлоропластах Хламидомонада". Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 104 (14): 5883–5888. Bibcode:2007ПНАС..104.5883Н. Дои:10.1073 / pnas.0609996104. ЧВК  1851586. PMID  17389370.
  15. ^ Kuo, M. M.-C .; Бейкер, К. А .; Wong, L .; Чхве, С. (2007). «Динамические олигомерные превращения цитоплазматических доменов RCK опосредуют активность калиевых каналов MthK». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 104 (7): 2151–2156. Bibcode:2007ПНАС..104.2151К. Дои:10.1073 / pnas.0609085104. ЧВК  1892972. PMID  17287352.
  16. ^ Kuo, M. M.-C .; Saimi, Y .; Kung, C .; Чхве, С. (2007). «Патч-кламп и фенотипический анализ прокариотического циклического нуклеотид-зависимого K+ канал с использованием кишечная палочка как хозяин ". Журнал биологической химии. 282 (33): 24294–24301. Дои:10.1074 / jbc.M703618200. ЧВК  3521034. PMID  17588940.
  17. ^ Gietz, R.D .; Вудс, Р.А. (2001). «Генетическая трансформация дрожжей». Биотехнологии. 30 (4): 816–820, 822–826, 828. Дои:10.2144 / 01304rv02. PMID  11314265.
  18. ^ Лю, И .; Лю, М .; Шергилл, К. (2006). «Влияние образования сферопластов на эффективность трансформации в кишечная палочка DH5α " (PDF). Журнал экспериментальной микробиологии и иммунологии. 9: 81–85.

внешняя ссылка