Радиальная иммунодиффузия - Radial immunodiffusion

Радиальная иммунодиффузия (RID) или метод Манчини, иммунодиффузия Манчини или однократный радиальный иммунодиффузионный анализ. иммунодиффузия техника, используемая в иммунология для определения количества или концентрации антиген в образце.

Описание

Подготовка

Раствор, содержащий антитело добавляется в нагретую среду, такую ​​как агар или же агароза растворен в буферизованный физиологический раствор. Затем расплавленную среду выливают на предметное стекло микроскопа или в открытый контейнер, например чашка Петри, и дали остыть и сформировать гель.[1][2][3] Затем раствор, содержащий антиген, помещают в лунку, которую пробивают в геле.[2][3][4] Затем предметное стекло или контейнер накрывают или закрывают, чтобы предотвратить испарение.[2][3][4]

Антиген радиально диффундирует в среду, образуя круг осаждение который отмечает границу между антителом и антигеном.[1] Диаметр круга увеличивается со временем, поскольку антиген диффундирует в среду, вступает в реакцию с антителом и образует нерастворимые комплексы осадка.[1][2][5] Количественное определение антигена проводят путем измерения диаметра круга преципитина и сравнения его с диаметром кружков преципитина, образованных известными количествами или концентрациями антигена.[1][2][3][6]

Комплексы антиген-антитело малы и растворимы в избытке антигена. Поэтому осаждение около центра круга обычно менее плотное, чем около внешнего края круга, где антиген менее сконцентрирован.[1][2]

Расширение круга достигает конечной точки и прекращается, когда свободный антиген исчерпывается и когда антиген и антитело достигают эквивалентности.[1][2][5] Однако четкость и плотность внешнего края круга могут продолжать увеличиваться после того, как круг перестанет расширяться.[1]

Интерпретация

Для большинства антигенов площадь и квадрат диаметра круга в конечной точке круга прямо пропорциональны количеству антигена и обратно пропорциональны концентрации антитела.[1][2][5] Следовательно, график, на котором сравниваются количества или концентрации антигена в исходных образцах с площадями или квадратами диаметров кружков преципитина на линейных шкалах, обычно будет прямой линией, когда все кружки достигнут своих конечных точек (метод эквивалентности). .[1][3][5][6]

Круги, которые создают небольшие количества антигена, достигают своих конечных точек раньше, чем круги, создаваемые большими количествами.[1][2][5] Следовательно, если площади или диаметры кругов измеряются, в то время как некоторые, но не все круги перестали расширяться, такой график будет прямым в той части, которая содержит меньшие количества или концентрации антигена, и будет изогнутой в той части, которая содержит большие количества или концентрации.[1][5]

Хотя круги все еще расширяются, график, который сравнивает количества или концентрации антигена в логарифмической шкале с диаметрами или площадями кругов в линейной шкале, может быть прямой линией (кинетический метод).[1][2][4][5][6][7] Однако круги в осадке меньше и менее отчетливы во время расширения, чем после того, как расширение закончилось.[1][5] Кроме того, температура влияет на скорость расширения, но не влияет на размер круга в его конечной точке.[1] Кроме того, диапазон диаметров кружков для одних и тех же количеств или концентраций антигена меньше, в то время как некоторые кружки увеличиваются, чем после того, как все кружки достигли своих конечных точек.[1][5]

Количество и концентрация нерастворимых комплексов антиген-антитело на внешнем крае круга со временем увеличивается.[1] Таким образом, ясность и плотность внешнего края круга также увеличиваются со временем.[1] В результате измерения размеров кругов и графики, полученные на основе этих измерений, часто бывают более точными после того, как круги перестали расширяться, чем когда круги все еще увеличиваются.[1] По этим причинам часто более желательно проводить измерения после того, как все круги достигли своих конечных точек, чем проводить измерения, когда некоторые или все круги все еще увеличиваются.[1]

Измерения больших кругов более точны, чем измерения маленьких кругов.[1] Поэтому часто желательно отрегулировать концентрацию антитела и количество антигена, чтобы гарантировать, что кольца преципитина будут большими.[1]

Радиальная иммунодиффузия

  • Измерение кругов при расширении всех (кинетический метод)[4]
  • Измерительные круги после того, как все достигают своих конечных точек (метод эквивалентности)[2][3]

Рекомендации

  1. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м п о п q р s т ты Берн, BH (1974-01-01). «Различная методология и уравнения, используемые для количественного определения иммуноглобулинов с помощью радиальной иммунодиффузии - сравнительная оценка известных и коммерческих методов» (PDF). Клиническая химия. Вашингтон, округ Колумбия.: Американская ассоциация клинической химии. 20 (1): 61–69. Дои:10.1093 / Clinchem / 20.1.61. ISSN  0095-1137. LCCN  58002529. OCLC  43430009. PMID  4203461. Архивировано из оригинал (PDF) на 2017-08-08. Получено 2015-11-15.
  2. ^ а б c d е ж грамм час я j k Дэвис NC, Хо М. (1976). «Глава 2: Количественное определение иммуноглобулинов: радиальная иммунодиффузия». В Rose N, Friedman H (ред.). Руководство по клинической иммунологии. Вашингтон, округ Колумбия.: Американское общество микробиологии. С. 5–8. ISBN  0-914826-09-3. LCCN  76017595. OCLC  1036571523. Получено 2019-06-14 - через Интернет-архив.
  3. ^ а б c d е ж Стэнли Дж. (2002). "Глава 12: Осаждение: одиночная радиальная иммунодиффузия: лабораторный метод 12-1: Радиальный иммунодиффузионный тест". Основы иммунологии и серологии. Олбани, Нью-Йорк: Делмар Подразделение Thomson Learning. С. 172–174. ISBN  978-0914826255. LCCN  2002280630. OCLC  50204319. Получено 2017-05-15 - через Google Книги. В архиве 2014-11-29 в Wayback Machine.
  4. ^ а б c d Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC / MIP (2002). «II. Лабораторная работа: Б. Радиальная иммунодиффузия». Упражнение 3: Антиген-антитело I. Новый Орлеан, Луизиана: Медицинский факультет Университета штата Луизиана: Кафедра микробиологии, иммунологии и паразитологии. Получено 2015-11-14. В архиве 2004-08-04 в Wayback Machine.
  5. ^ а б c d е ж грамм час я (1) Манчини Дж., Карбонара А.О., Хереманс Дж. Ф. (сентябрь 1965 г.). «Иммунохимическое количественное определение антигенов с помощью однократной радиальной иммунодиффузии». Иммунохимия. Оксфорд, Англия: Pergamon Press. 2 (3): 235–254. Дои:10.1016/0019-2791(65)90004-2. ISSN  0019-2791. LCCN  64009461. OCLC  53097967. PMID  4956917. Получено 2020-07-08 - через ScienceDirect.
    (2) Манчини Г., Верман Дж. П., Карбонара А. О., Хереманс Дж. Ф. (декабрь 1964 г.). Петерс, Хуберт (ред.). Одно-радиально-диффузионный метод иммунологического количественного определения белков.. Протиды биологических жидкостей: материалы 11-го коллоквиума, Брюгге, Бельгия (1963). Амстердам, Нидерланды: Эльзевир. С. 370–373. OCLC  25285708. Получено 2020-07-08 - через Google Книги. В архиве 2019-12-09 в Wayback Machine.
  6. ^ а б c Парвез З (1984). «Глава 4: Обзор иммунологических методов: радиальная иммунодиффузия (RID)». Иммуноанализы в тестировании коагуляции. Нью-Йорк: Springer-Verlag. С. 21–22. Дои:10.1007/978-1-4615-7225-1_5. ISBN  9781461572251. LCCN  83020115. OCLC  851823206. Получено 2020-07-08. В архиве 2020-07-08 в Wayback Machine.
  7. ^ Фэи Дж. Л., Маккелви Э. М. (1965-01-01). «Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов в чашках антитело-агар» (PDF). Журнал иммунологии. Балтимор, Мэриленд: Американская ассоциация иммунологов. 94 (1): 84–90. ISSN  1048-3233. LCCN  sf85007036. OCLC  204767467. PMID  14253527. Получено 2007-07-08. В архиве 2018-02-25 в Wayback Machine.

дальнейшее чтение

внешняя ссылка