Фенотипическое тестирование микобактерий - Phenotypic testing of mycobacteria

В микробиология, то фенотипическое тестирование микобактерий использует ряд методов. Наиболее часто используемые фенотипический тесты для идентификации и различения Микобактерии штаммы и виды друг от друга описаны ниже.

Тесты

Ацетамид как единственный источник углерода и азота

Средства массовой информации: KH2PO4 (0,5 г), MgSO>4* 7H20 (0,5 г), очищенный агар (20 г), дистиллированный вода (1000 мл). Среда дополнена ацетамид до конечной концентрации 0,02М, доведенной до pH 7,0 и стерилизовано автоклавирование при 115 ° C в течение 30 минут. После наклонный, среда инокулируется одним петля культур и инкубировали. Рост измеряется после инкубации в течение двух недель (для быстрого выращивания) или четырех недель (для медленного выращивания).[1]

Тест на арилсульфатазу

Фермент арилсульфатаза присутствует в большинстве микобактерий. Скорость, с которой фермент арилсульфатаза расщепляет дисульфат фенолфталеина на фенолфталеин (который образует красный цвет в присутствии бикарбоната натрия) и другие соли, используется для дифференциации определенных штаммов микобактерий. 3-дневный тест на арилсульфатазу используется для выявления потенциально патогенных быстрорастущих растений, таких как M. fortuitum и M. chelonae. Медленнорастущие M. marinum и M. szulgai положительны в 14-дневном тесте на арилсульфатазу.[2]

Каталаза, полуколичественная активность

Большинство микобактерий продуцируют фермент каталаза, но они различаются по производимому количеству. Кроме того, некоторые формы каталазы инактивируются при нагревании при 68 ° C в течение 20 минут (другие стабильны). Организмы, производящие фермент каталазу, обладают способностью разлагаться. пероксид водорода в воду и свободный кислород. Тест отличается от теста, используемого для обнаружения каталазы у других типов бактерий, с использованием 30% перекиси водорода в сильном растворе моющего средства (10% полисорбат 80 ).[1]

Цитрат

Единственный углерод источник[1]

Яйцо среднее

Рост на Среда Левенштейна – Йенсена (ЖЖ средний)

L-глутамат

Подошва углерода и азот источник[1]

Скорость роста

Скорость роста - это время, необходимое для образования зрелых колоний, видимых без увеличения на твердой среде. Микобактерии, образующие колонии, видимые невооруженным глазом в течение семи дней после субкультуры, известны как быстрорастущие, в то время как те, которым требуется более длительный период, называются медленными.[3]

Поглощение железа

Умение заняться утюг из неорганического железа, содержащего реагент помогает дифференцировать некоторые виды микобактерий.[1]

Лебек средний

Лебек - полутвердая среда, используемая для проверки кислородного предпочтения микобактериальных изолятов. Об аэрофильном росте свидетельствует рост на (и выше) поверхности стеклянной стенки пробирки; на микроаэрофильный рост указывает рост под поверхностью.[4]

Агар МакКонки без кристаллического фиолетового
[5]
Накопление ниацина (метод бумажной полоски)
Смотрите также: Ниациновый тест

Ниацин образуется в качестве побочного продукта метаболизма всеми микобактериями, но некоторые виды обладают ферментом, который превращает свободный ниацин в ниацин рибонуклеотид. М. туберкулез (и некоторые другие виды) не имеют этого фермента и накапливают ниацин как водорастворимый побочный продукт в культуральной среде.[1]

Снижение содержания нитратов

Микобактерии, содержащие нитроредуктаза катализировать сокращение от нитрат к нитрит. Присутствие нитрита в тестовой среде определяется добавлением сульфаниламид и н-нафтилэтилендиамин. Если нитрат присутствует, красный диазоний краситель образуется.[1]

Фотореактивность микобактерий;

Некоторые микобактерии производят каротиноид пигменты без света; другие требуют фотоактивации для производства пигмента. Фотохромогены образуют непигментированные колонии при выращивании в темноте и пигментированные колонии после воздействия света и повторной инкубации. Скотохромогены образуют колонии от темно-желтого до оранжевого цвета при выращивании на свету или в темноте. Нефотохромогены не окрашиваются в свет и темноту или имеют бледно-желтый, желтовато-коричневый или коричневый пигмент, который не усиливается после воздействия света.[3]

Пиши терпимость

Растет на агаре Саутон, содержащем пикриновая кислота (0,2% мас. / Об.) Через три недели[1]

Пигментация

Некоторые микобактерии производят каротиноидные пигменты без света; другие требуют фотоактивации для производства пигмента (см. фотореактивность выше).[3]

Чувствительность к пиразинамиду (PZA)

В дезамидирование из пиразинамид к пиразиновая кислота (предполагается, что это активный компонент препарата пиразинамид ) за четыре дня - это полезная физиологическая характеристика, по которой М. туберкулез-комплексы можно выделить.[1]

Толерантность к хлориду натрия

Рост на среде LJ, содержащей 5% NaCl[1]

Чувствительность к гидразиду тиофен-2карбоновой кислоты (TCH)

Рост М. bovis и М. africanum подтип II ингибируется тиофен-2карбоновой кислотой гидразид; рост М. туберкулез и М. africanum подтип I не ограничен.[1]

Полисорбат 80 гидролиз

Тест на липаза с использованием полисорбата 80 (моноолеат полиоксиэтиленсорбитана, детергент). Некоторые микобактерии обладают липазой, которая расщепляет их на олеиновая кислота и полиоксиэтилированный сорбитол. Тестовый раствор также содержит фенол красный, который стабилизируется полисорбатом 80; когда последние 80 гидролизуются, феноловый красный цвет меняется с желтого на розовый.[1]

Уреаза (адаптация к микобактериям)

С помощью инокуляционной петли несколько петель тестовых колоний микобактерий переносят в 0,5 мл уреаза субстрат, смешанный для эмульгирования и инкубированный при 35 ° C в течение трех дней; изменение цвета (от янтарно-желтого до розово-красного).[1]

Рекомендации

  1. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м Конеман, Э. (1988). Диагностическая микробиология. Филадельфия: Дж. Б. Липпинкотт.
  2. ^ АЧАРЬЯ, ТАНКЕШВАР. «Основные биохимические методы, используемые для выделения группы микобактерий». Получено 21 ноября 2014.
  3. ^ а б c Метчок, Б.Г .; Nolte, F.S .; Уоллес, Р.Дж. (1999). «Микобактерии». In Murray, P.R .; Барон, E.J .; Pfaller, M.A .; Tenover, F.C .; Yolken, R.H. (ред.). Руководство по клинической микробиологии. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press. С. 399–427.
  4. ^ Deutsches Institut für Normung (1993). «Часть 9: минимальные требования для идентификации туберкулезных микобактерий». Медицинская микробиология: диагностика туберкулеза. Берлин: Beuth Verlag (DIN 58943-9).
  5. ^ М. Цукамура. «Адансоновская классификация микобактерий». Журнал общей микробиологии. 45: 252–273. Дои:10.1099/00221287-45-2-253.