Субкультура (биология) - Subculture (biology)

В биология, а субкультура это новый клетка или же микробиологическая культура сделано путем передачи некоторых или всех клетки от предыдущей культуры к свежей среда роста. Это действие называется субкультивирование или же переход клетки. Субкультура используется для продления жизни и / или увеличения количества клеток или микроорганизмов в культуре.^[1]

Роль

Клеточные линии и микроорганизмы не могут храниться в культуре бесконечно из-за постепенного роста токсичный метаболиты, использование питательные вещества и увеличение количества клеток за счет роста. Таким образом, субкультура используется для получения новой культуры с более низкой плотностью клеток, чем исходная культура, свежими питательными веществами и отсутствием токсичных метаболитов, что позволяет продолжать рост клеток без риска их гибели. Субкультура важна как для размножающихся (например, таких микроорганизмов, как Кишечная палочка ) и нераспространяющиеся (например, окончательно дифференцированный белые кровяные клетки ) клетки.

Как правило, субкультура происходит из культуры определенного объема в свежую питательную среду равного объема, что обеспечивает долгосрочное поддержание линии клеток. Субкультуру в больший объем питательной среды используют, когда нужно увеличить количество клеток, например, для использования в промышленном процессе или научном эксперименте.

Номер прохода

Часто важно записывать приблизительное количество делений клеток в культуре, записывая количество пассажей или субкультур. В случае растение Сомаклональные вариации клеток ткани могут возникать в течение длительного периода в культуре. Аналогично в млекопитающее Сотовые линии хромосомные аберрации имеют тенденцию к увеличению со временем. У микроорганизмов есть тенденция адаптироваться к условиям культивирования, что редко бывает точно таким же, как естественная среда микроорганизма, которая может изменить их биологию.

Протоколы прохождения

Протокол субкультивирования клеток сильно зависит от свойств участвующих клеток.

Неприлипающие клетки

Многие типы клеток, в частности, многие микроорганизмы, растут в растворе и не прикрепляются к поверхности. Эти типы клеток можно субкультивировать, просто взяв небольшой объем родительской культуры и разбавив его свежей питательной средой. Плотность клеток в этих культурах обычно измеряется в клетках на миллилитр для крупных эукариотических клеток или как оптическая плотность для света 600 нм для более мелких клеток, таких как бактерии. Клетки часто будут иметь предпочтительный диапазон плотностей для оптимального роста, и субкультивирование обычно будет пытаться удерживать клетки в этом диапазоне.

Адгезивные клетки

Прилипшие клетки, например многие линии клеток млекопитающих, растут прикрепленными к поверхности, такой как дно колба для культивирования. Эти типы клеток необходимо отделить от поверхности, прежде чем их можно будет субкультивировать. Для прикрепленных клеток плотность клеток обычно измеряется в единицах слияние, процент поверхности роста, покрытой клетками. Клетки часто будут иметь предпочтительный диапазон конфлюэнтностей для оптимального роста, например линия клеток млекопитающих, такая как HeLa или же Сырой 264,7 обычно предпочитают слияния более 10%, но менее 100%, и субкультура обычно пытается удерживать клетки в этом диапазоне. Для субкультуры клетки можно отделить одним из нескольких методов, включая трипсин обработка для расщепления белков, ответственных за поверхностную адгезию, хелатирование ионов кальция с EDTA который нарушает некоторые механизмы прилипания к белку, или механические методы, такие как многократная промывка или использование скребка для клеток. Затем отделенные клетки ресуспендируют в свежей среде для выращивания и дают им возможность снова осесть на их поверхность для роста.

Смотрите также

Трипсинизация