Полли и Молли - Polly and Molly

Полли и Молли (1997 г.р.), двое овцы, были первыми млекопитающие быть успешным клонированный от взрослого соматика клетка и быть трансгенный животные одновременно.^[1] Это не следует путать с Овечка Долли, первое животное, которое было успешно клонировано из взрослой соматической клетки без модификации ядра взрослого донора. Полли и Молли, как и Овечка Долли, были клонированы в Институт Рослина в Эдинбург, Шотландия.

Создание Полли и Молли было основано на экспериментах по переносу соматического ядра, которые привели к клонированию овечки Долли. Решающее различие заключалось в том, что при создании Полли и Молли ученые использовали клетки, в которые был вставлен новый ген. Выбранный ген представлял собой терапевтический белок, чтобы продемонстрировать потенциал такой технологии рекомбинантной ДНК в сочетании с клонированием животных. Мы надеемся, что это можно будет использовать для производства фармакологических и терапевтических белков для лечения заболеваний человека. Речь идет о белке свертывания крови человека. фактор IX. Еще одним отличием от Овечки Долли был источник тип ячейки ядра, которое было перенесено.

До производства Полли и Молли единственным продемонстрированным способом создания трансгенного животного был микроинъекция ДНК в пронуклеусы удобрений ооциты (яйца). Однако лишь небольшая часть животных интегрирует введенную ДНК в свой геном. В редких случаях, когда они интегрируют эту новую генетическую информацию, характер экспрессии белка введенного трансгена из-за случайной интеграции очень изменчив. Поскольку целью таких исследований является получение животного, которое экспрессирует определенный белок в больших количествах, например, в его молоке, микроинъекция является очень дорогостоящей процедурой, которая обычно не дает желаемого животного.

У мышей есть дополнительная возможность генетического переноса, недоступная для других животных. Эмбриональные стволовые клетки предоставить средства для переноса новой ДНК в зародышевый. Они также допускают точные генетические модификации с помощью нацеливание на гены. Можно выбрать модифицированные эмбриональные стволовые клетки in vitro до того, как эксперимент перейдет к производству животных. Эмбриональные стволовые клетки, способные вносить вклад в зародышевую линию таких видов домашнего скота, как овцы, не изолированы.

Постановка овечки Долли, а также Меган и Мораг, две овцы, которые привели к появлению Долли, продемонстрировали, что жизнеспособных овец можно получить с помощью передача ядер из множества Соматическая клетка типы, выращенные in vitro. Полли и Молли представляли следующий этап, на котором соматические клетки культивировали in vitro, как и в случае с предыдущей овцой. Однако в этом случае они были трансфицированы чужеродной ДНК, и были отобраны трансфицированные клетки, которые стабильно интегрировали эту новую часть генетической информации. Затем ядра этих соматических клеток переносили в пустой ооцит, как в процедуре переноса ядра, и это использовали для получения нескольких трансгенных животных. Использовался PDFF типа ячейки. PDFF5 производит самцов животных и не трансдуцируется. Клетки типа PDFF2 продуцировали самок животных и были трансдуцированы. Из произошедших беременностей родились три животных PDFF2, двое из которых пережили рождение, 7LL8 и 7LL12. Эти животные были трансфицированы, но содержали маркерный ген. нет интересующий клонированный ген. Их назвали «Холли» и «Олли».^[2] Еще два подмножества продуцирующих самок клеток PDFF2, PDFF2-12 и PDFF2-13, также дали животных, которые имели интересующую клетку вместе с маркером. Из этих ягнят 7LL12, 7LL15 и 7LL13 родились живыми и здоровыми. Двое из них звали Полли и Молли.

Трансген

Трансген, который был вставлен в донорские соматические клетки, был разработан для экспрессии свертывания крови человека. фактор IX белок в молоке овец. Этот белок играет важную роль в свертывании крови, и его недостаток приводит к заболеванию. гемофилия B для лечения которых требуется внутривенная инфузия фактора IX. Производство этого белка в молоке домашнего скота, процесс, известный как фарминг, обеспечит источник этого терапевтического белка, который снизит стоимость, а также будет свободен от потенциального инфекционного риска, связанного с текущим источником этого белка (кровь человека).

Рекомендации

1. Маккрит, К. Дж .; Howcroft, J .; Кэмпбелл, К. Х. С .; Colman, A .; Schnieke, A.E .; Кинд, А. Дж. (29 июня 2000 г.). «Производство овец, нацеленных на ген, путем переноса ядра из культивируемых соматических клеток». Природа. 405 (6790): 1066–1069. Дои:10.1038/35016604. PMID  10890449.
2. Алан Колман (ноябрь 1999 г.). «Долли, Полли и другие« олли »: вероятное влияние технологии клонирования на биомедицинское использование домашнего скота». Genet анальный. Генетический анализ: биомолекулярная инженерия. 15 (3–5): 167–173. Дои:10.1016 / с 1050-3862 (99) 00022-4. PMID  10596758.

• А. Э. Шниеке; и другие. (1997). «Трансгенные овцы с человеческим фактором IX, полученные путем переноса ядер из трансфицированных фибробластов плода». Наука. 278 (5346): 2130–2133. Дои:10.1126 / science.278.5346.2130. PMID  9405350.