Реакция амплификации фермента никения - Nicking enzyme amplification reaction

Реакция амплификации фермента Nicking (NEAR) - это метод для in vitro ДНК усиление как полимеразной цепной реакции (ПЦР). NEAR изотермичен, реплицирует ДНК при постоянной температуре с использованием полимераза (и выщипывающий фермент ) для экспоненциальной амплификации ДНК в диапазоне температур от 55 ° C до 59 ° C.

Одним из недостатков ПЦР является то, что она требует времени, чтобы разворачивать двунитевую ДНК под действием тепла в одиночные цепи (процесс, называемый денатурация ). Это приводит к тому, что время амплификации обычно составляет тридцать минут или более для получения значительного количества амплифицированных продуктов.[1][циркулярная ссылка ]

Потенциальными преимуществами NEAR перед PCR являются повышенная скорость и более низкие требования к энергии, характеристики, общие с другими схемами изотермического усиления.[2] Основным недостатком NEAR по сравнению с ПЦР является то, что получение продуктов неспецифической амплификации является общей проблемой при реакциях изотермической амплификации.[3]

В реакции NEAR используются природные или сконструированные эндонуклеазы, которые вводят разрыв цепи только в одну цепь сайта расщепления двухцепочечной ДНК. Способность некоторых из этих ферментов катализировать изотермическую амплификацию ДНК была раскрыта, но не заявлена ​​в патентах, выданных на сами ферменты.[4][5]

Рекомендации

  1. ^ Полимеразной цепной реакции
  2. ^ Биосенсоры 2013, 3, 18-43; DOI: 10.3390 / bios3010018
  3. ^ Биохимия. 2008 23 сентября; 47 (38): 9987-99. DOI: 10.1021 / bi800746p.
  4. ^ Патент США 6,191,267. 20 февраля 2001 г.
  5. ^ Патент США 6,660,475. 9 декабря 2003 г.
  • Заявка на патент США 20090081670. 26 марта 2009 г. РЕАКЦИЯ НИКНИНГА И РАСШИРЕНИЯ УСИЛЕНИЯ ДЛЯ ЭКСПОНЕНЦИАЛЬНОГО УСИЛЕНИЯ ЯДЕРНЫХ КИСЛОТ.