Реагент Элманса - Ellmans reagent

Реагент Эллмана[1]
DTNB.svg
Имена
Предпочтительное название IUPAC
5,5'-Дисульфандиилбис (2-нитробензойная кислота)
Другие имена
3,3'-дисульфандиилбис (6-нитробензойная кислота)
5- (3-Карбокси-4-нитрофенил) дисульфанил-2-нитробензойная кислота
Дитионитробензойная кислота
5,5'-Дитиобис (2-нитробензойная кислота)
Идентификаторы
3D модель (JSmol )
СокращенияDTNB
ЧЭБИ
ЧЭМБЛ
ChemSpider
ECHA InfoCard100.000.650 Отредактируйте это в Викиданных
UNII
Характеристики
C14ЧАС8N2О8S2
Молярная масса396.34 г · моль−1
Температура плавления От 240 до 245 ° C (от 464 до 473 ° F, от 513 до 518 K) (разлагается)
Опасности
R-фразы (устарело)R36 / 37/38
S-фразы (устарело)S26 S36
Если не указано иное, данные для материалов приведены в их стандартное состояние (при 25 ° C [77 ° F], 100 кПа).
проверитьY проверять (что проверитьY☒N ?)
Ссылки на инфобоксы

Реагент Эллмана (5,5'-дитиобис- (2-нитробензойная кислота) или DTNB) является химическим веществом, используемым для количественной оценки количества или концентрации тиол группы в образце.[2] Его разработал Джордж Л. Эллман.

Подготовка

В оригинальной статье Эллмана[2] он приготовил этот реагент, окисляя 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, вводя тиол через сульфид натрия, и связывание мономера путем окисления с йод. Сегодня этот реагент легко доступен в продаже.

Тест Эллмана

Тиолы реагируют с этим соединением, расщепляя дисульфидная связь с образованием 2-нитро-5-тиобензоата (TNB−), который ионизируется до TNB2− дианион в воде при нейтральном и щелочном pH. Это TNB2− ion имеет желтый цвет.

Реакция DTNB с тиолом (R-SH).

Эта реакция является быстрой и стехиометрической, при добавлении одного моля тиола высвобождается один моль TNB. TNB2− количественно оценивается в спектрофотометр измеряя поглощение видимого света на длине волны 412 нм, используя коэффициент экстинкции из 14 150M−1 см−1 для разбавленных буферных растворов,[3][4] и коэффициент 13,700 M−1 см−1 для высоких концентраций соли, например, 6 M гуанидиния гидрохлорид или 8 М мочевины.[4] К сожалению, коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был недооценен в оригинальной публикации 1959 г. и составлял 13 600 M−1 см−1, и, как отмечалось в недавней статье, эта ошибка сохраняется в литературе.[5] Коммерческий DTNB может быть не полностью чистым, поэтому может потребоваться перекристаллизация для получения полностью точных и воспроизводимых результатов.[4]

Реагент Эллмана можно использовать для измерения тиолов с низкой молекулярной массой, таких как глутатион как в чистых растворах, так и в биологических образцах, таких как кровь.[6] Он также может измерять количество тиоловых групп в белках.[6]

Рекомендации

  1. ^ 5,5'-Дитиобис (2-нитробензойная кислота) в Сигма-Олдрич
  2. ^ а б Эллман Г.Л. (1959). «Тканевые сульфгидрильные группы». Arch. Biochem. Биофизы. 82 (1): 70–7. Дои:10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID  13650640.
  3. ^ Кольер HB (1973). «Письмо: Примечание о молярной поглощающей способности восстановленного реагента Эллмана, 3-карбоксилато-4-нитротиофенолята». Анальный. Биохим. 56 (1): 310–1. Дои:10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID  4764694.
  4. ^ а б c Загадки П. У., Блейкли Р. Л., Зернер Б. (1983). «[8] Переоценка реактива Эллмана». Повторная оценка реактива Эллмана. Meth. Энзимол. Методы в энзимологии. 91. С. 49–60. Дои:10.1016 / S0076-6879 (83) 91010-8. ISBN  978-0-12-181991-0. PMID  6855597.
  5. ^ Ринер С.К., Када Г., Грубер Х.Дж. (2002). «Быстрое измерение белковых сульфгидрилов с помощью реактива Эллмана и 4,4'-дитиодипиридина». Анальный Биоанал Химия. 373 (4–5): 266–76. Дои:10.1007 / s00216-002-1347-2. PMID  12110978. S2CID  30366479.
  6. ^ а б Riener, Christian K .; Када, Джеральд; Грубер, Герман Дж. (01.07.2002). «Быстрое измерение белковых сульфгидрилов с реактивом Эллмана и 4,4'-дитиодипиридином». Аналитическая и биоаналитическая химия. 373 (4–5): 266–276. Дои:10.1007 / s00216-002-1347-2. ISSN  1618-2642. PMID  12110978. S2CID  30366479.

внешняя ссылка