Анализ АТФазы - ATPase assay

В Анализ АТФазы это мембрана проба что косвенно измеряет активность переносчики оттока. АТФ Связывающая кассета или переносчики оттока опосредуют транспорт субстраты через клеточные мембраны против градиент концентрации. Расщепление АТФ тесно связано с транслокацией субстрата, поскольку энергия транслокации субстрата происходит от Гидролиз АТФ. Гидролиз АТФ дает неорганический фосфат (Pi), который можно измерить с помощью простой колориметрической реакции. Количество освобожденного Pi прямо пропорционально активности транспортера.[1]

Использование анализа АТФазы

Анализ АТФазы предназначен для определения характера взаимодействия между соединением и транспортер. Анализы АТФазы используются в двух разных режимах: активация АТФазы и ингибирование АТФазы. Перевезено субстраты увеличивают базовую активность АТФазы, в то время как ингибиторы или медленно транспортируемые соединения ингибируют базовую активность АТФазы и / или активность АТФазы, измеренную в присутствии стимулирующего агента. Следовательно, анализы АТФазы могут иметь потенциал для определения того, действует ли соединение как субстрат-переносчик и / или ингибитор.[2][3]

Мутации в домене АТФазы приводят к потере транспортной функции. Активность переносчика множества лекарственных средств в устойчивых к лекарствам клетках связана с быстрым истощением клеточного АТФ, когда синтез АТФ ингибируется.

Рекомендации

  1. ^ Главинас Х., Мен Д., Яни М., Остерхейс Б., Хереди-Сабо К., Крайчи П. (июнь 2008 г.). «Использование препаратов мембранных везикул для изучения взаимодействия лекарственного средства с переносчиком ABC». Мнение эксперта по метаболизму лекарств и токсикологии. 4 (6): 721–32. Дои:10.1517/17425255.4.6.721. PMID  18611113.
  2. ^ Кис Э., Раджнаи З., Йоджа Э. и др. (Январь 2009 г.). «Анализ мышиной Bsep ATPase: нерадиоактивный инструмент для оценки холестатического потенциала лекарств». Журнал биомолекулярного скрининга. 14 (1): 10–5. Дои:10.1177/1087057108326145. PMID  19029016.
  3. ^ Sarkadi B, Price EM, Boucher RC, Germann UA, Scarborough GA (март 1992 г.). «Экспрессия кДНК человеческой множественной лекарственной устойчивости в клетках насекомых генерирует высокоактивную мембранную АТФазу, стимулированную лекарствами». Журнал биологической химии. 267 (7): 4854–8. PMID  1347044.